Infusión de hojas de Moringa oleifera L (moringa) y cascarilla de Theobroma cacao L (cacao)

Artículo original

 

Diseño de una infusión de hojas de Moringa oleifera L (moringa) y cascarilla de Theobroma cacao L (cacao)

Design of an infusion of Moringa oleifera L. (moringa) leaves and Theobroma cacao L. (cocoa) husk

 

Mercedes Campo Fernández1* ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9835-6886
Carla Gabriela Sojos Asencio1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-0002-7030-8823
Elsa Viviana Bastidas Bastidas1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002 -1783-0333
Karla María Silva Susal1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3250-1366
Nubia L Matute Castro1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-
Jorge Vicente Cun Carrión1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-7876-7653
Osmany Cuesta-Rubio1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-9490-8735
Carmita Galdys Jaramillo Jaramillo1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-3745-8635
Ingrid Márquez Hernández1 ORCID: https://orcid.org/0000-0002-1629-6657

1Universidad Técnica de Machala. Machala, Ecuador.


*Autor para la correspondencia. Correo electrónico: mcampo1972@yahoo.es

 

 


RESUMEN

Introducción: Las hojas de Moringa oleifera L (moringa) han ganado popularidad desde el punto de vista nutricional y terapéutico gracias a los compuestos bioactivos que contiene. La combinación con la cascarilla de Theobroma cacao L (cacao) podría favorecer su consumo en forma de infusión mediante la cual se aprovechan más los macro y micronutrientes, así como sus metabolitos hidrosolubles con posibles beneficios para la salud humana.
Objetivos: Diseñar una formulación combinando las hojas de moringa como ingrediente esencial y la cascarilla de cacao para lograr una bebida potencialmente funcional, de calidad y beneficiosa para la salud humana.
Método: Se determinó la calidad de las hojas secas de moringa mediante la humedad residual, las cenizas totales e insolubles en ácido, proteína, fibra, grasas, minerales, tamizaje fitoquímico, fenoles totales y la capacidad antioxidante. Se estandarizó la formulación diseñada según su pH, la densidad relativa, el índice de refracción, los grados Brix, la fructosa y glucosa. Además, se analizaron los marcadores químicos mediante espectrometría de masas, el contenido de los fenoles totales mediante el método de Folin-Ciocalteu y la actividad antioxidante mediante el DPPH.
Resultados: Los parámetros evaluados en las drogas secas se encuentran dentro de los límites referidos en la literatura, se destaca un elevado contenido en minerales, fundamentalmente, potasio, calcio, magnesio, hierro y manganeso. El contenido de fenoles totales fue de 3 521 mg de polifenoles EAG/ 100 g de droga y una capacidad antioxidante del 85,74 %. El análisis de la infusión mediante espectrometría de masas indicó la presencia de flavonoides glicosidados y glucosinolatos; mientras que el contenido de polifenoles en 200 mL de agua caliente fue 43,2 mg (0,22 mg/mL), y mostró una capacidad inhibitoria del DPPH del 70,70 %.
Conclusiones: La infusión diseñada posee las características necesarias para ser considerada gracias a sus propiedades nutricionales y antioxidantes como una bebida beneficiosa para la salud humana y con gran aceptación desde el punto de vista sensorial.

Palabras claves: Moringa oleifera L; Theobroma cacao L; cascarilla de cacao; infusión; compuestos fenólicos; DPPH.


ABSTRACT

Introduction: Owing to its bioactive compounds, Moringa oleifera L (moringa) has gained popularity both as food and as therapy. Combination with Theobroma cacao L (cocoa) husk could foster its consumption as infusion, with which more people would benefit from its contents of macronutrients, micronutrients and water-soluble metabolites, useful as they are to improve human health.
Objectives: Design a formulation combining moringa leaves as the essential ingredient and cocoa husk to obtain a potentially functional quality drink beneficial to human health.
Method: The quality of the moringa dry leaves was determined by their residual humidity, total and acid-insoluble ashes, protein, fiber, fats, minerals, phytochemical screening, total phenols and antioxidant capacity. The formulation designed was standardized according to its pH, relative density, refractive index, degrees Brix, fructose and glucose. Additionally, chemical markers were analyzed by mass spectrometry, total phenolic content by the Folin-Ciocalteu method, and antioxidant activity by DPPH.
Results: The parameters evaluated for the dry drugs are within the limits reported in the literature, with a considerably high content of minerals, mainly potassium, calcium, magnesium, iron and manganese. Total phenolic content was 3 521 mg polyphenols EAG / 100 g drug and an antioxidant capacity of 85.74 %. Mass spectrometry analysis of the infusion revealed the presence of glycosylated flavonoids and glucosinolates, whereas polyphenolic content in 200 ml hot water was 43.2 mg (0.22 mg/ml), with a DPPH inhibition capacity of 70.70 %.
Conclusions: The infusion designed has the nutritional and antioxidant characteristics required to be considered a drink beneficial to human health as well as pleasant to the senses.

Key words: Moringa oleifera L, Theobroma cacao L, cocoa husk, infusion, phenolic compounds, DPPH.


 

Recibido: 01/07/2018
Aprobado: 12/10/2018

 

 

INTRODUCCIÓN

Moringa oleifera Lam (moringa) es una de las plantas más útiles en el mundo ya que puede ser aprovechada, fundamentalmente, como nutracéutico, suplemento dietético, alimento funcional, también como medicamento y con fines industriales.(1,2,3) Las elevadas concentraciones de macro y micronutrientes justifica su valor nutricional e incluso profiláctico.(4,5) En diferentes partes de la planta se han identificado aminoácidos, minerales, vitaminas, β-carotenos, ácidos grasos, esteroles, tocoferoles, alcaloides, glucosinolatos y compuestos fenólicos (flavonoides, ácidos fenólicos).(5,6,7,8,9,10)

La amplia gama de compuestos bioactivos que contiene la moringa le proporcionan propiedades farmacológicas, tales como: antioxidante, antiinflamatorio vascular, protector en la intoxicación por arsénico, antimicrobiano, además de que controla la diabetes mellitus tipo 2, disminuye la fatiga muscular, entre otras.(11,12,13)

Ecuador es uno de los principales países productores y exportadores de cacao. Esta industria genera grandes desperdicios, entre ellos, la cascarilla de cacao.(14) Dicho residuo, aunque habitualmente es desechado, en la actualidad se valora su empleo para elaborar nuevos productos alimenticios, debido a su alta capacidad antioxidante y su bajo costo.(15)

La cascarilla de cacao posee un elevado contenido de fibra dietética, también posee proteína, minerales, lípidos, carbohidratos, teobromina, cafeína y compuestos fenólicos.(16)

En Ecuador existen varias iniciativas relacionadas con la investigación y producción de moringa. Sin embargo, podría decirse que mucho de los productos que aparecen en el mercado carecen de los estudios que avalan su efectividad y calidad, sobre todo, en el plano nutricional.

Tomando en consideración lo antes planteado, este trabajo se propuso diseñar una formulación tipo té, usando la combinación de las hojas de moringa como ingrediente esencial y la cascarilla de cacao en polvo para aprovechar los componentes nutricionales y bioactivos de las materias primas vegetales y lograr un alimento potencialmente funcional, de calidad y con beneficios para la salud humana.

 

 

MÉTODO

Procesamiento de la droga vegetal (M. oleifera)

Las hojas de M. oleifera se cosecharon en los terrenos de la Unidad Académica de Ciencias Agropecuarias en febrero del 2017 a los 3 meses de sembrada. Fue identificada y herborizada en el Herbario Guay de la Universidad de Guayaquil Ecuador.

La droga vegetal se lavó con agua potable y se desinfectó con hipoclorito de sodio al 2 %. Se secó durante 5 días a temperatura ambiente y, posteriormente, en una estufa (MEMMERT) a 40 °C ± 2 °C durante 2 días hasta alcanzar el peso constante. Finalmente, se molió en un triturador de cuchillas (BLACK & DECKER). El material vegetal se tamizó y se obtuvo un tamaño de partícula inferior a 425 µm, luego se almacenó en fundas herméticas a temperatura ambiente.

Análisis de la droga vegetal cruda (hojas de moringa)

La determinación de humedad residual, cenizas totales, cenizas insolubles en ácido, fibra cruda y materia grasa, se realizó según métodos establecidos por la Asociación Oficial de Químicos Analíticos (AOAC, siglas en inglés)(17) y Miranda y Cuellar.(18)

La determinación de arsénico (As) y plomo (Pb) se efectuó en el laboratorio AVVE según la Norma ISO/IEC17025 siguiendo la metodología MMQ-AAS-04 para determinar As y la MMQ-AAS-28 para Pb, según procedimientos establecidos por dicho laboratorio.

La cuantificación de proteínas totales se hizo en el Instituto Nacional de Investigaciones Agropecuarias (INIAP), utilizando la metodología establecida por ellos (MO-LSAIA-01-04).

La determinación de minerales se efectuó por el método de digestión húmeda según normas de la AOAC.(17)

Determinación de fenoles totales por Folin-Ciocalteu

Para la preparación de la muestra, se extrajo 1 g de hojas secas de moringa con 70 ml de agua destilada mediante maceración por sonicación durante 30 minutos en un baño ultrasónico (UTRASONIC BATH 5.7 L, Fischer Scientific). El ensayo se efectuó siguiendo el método de Singleton(19) con algunas modificaciones. Se tomaron 0,1 ml de muestra, patrón (ácido gálico) o agua destilada (blanco), se adicionaron 5 ml de reactivo de Folin-Ciocalteu de SIGMA-ALDRICH (10 %) y 0,9 ml de agua destilada, se mezcló y se esperaron 5 minutos para, posteriormente, adicionar 4 ml de carbonato de sodio al 7,5 %. La mezcla se dejó reposar por 2 horas. La lectura se realizó en un espectrofotómetro (UVMINI-1240 SHIMADZU) a 765 nm.

La cuantificación se realizó mediante una curva de calibración con ácido gálico (SIGMA-ALDRICH) en concentraciones de 0,1 a 0,5 mg/ml. Cada determinación, de muestra y patrón, se realizó por triplicado.

Determinación de la capacidad secuestradora de radicales libres frente al 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH)

La muestra analizada se preparó de la misma manera antes descrita en la determinación de fenoles totales por Folin-Ciocalteu. Se preparó una disolución metanólica de DPPH (SIGMA-ALDRICH) a una concentración 0,1 mM. A cada muestra (1 mL) se le adicionaron 3 ml de la disolución de DPPH (0,1 mM), se dejaron a temperatura ambiente y oscuridad durante 30 min y se le midió, posteriormente, su absorbancia a 517 nm en el espectrofotómetro.

El por ciento de inhibición se determinó según la ecuación

% DPPH = (Ablanco- Amuestra) /Ablanco x 100

donde:

Ablanco: Absorbancia del DPPH (0,1 mM)

Amuestra: Absorbancia de la muestra luego de reaccionar con la disolución de DPPH por 30 min.(20)

Elaboración de la formulación

Se formuló con un peso neto de 1,05 g para infundir en 200 mL de agua caliente (moringa 0,80 g, cascarilla de cacao 0,20 g, ácido cítrico (GTM, CAS: 77-92-9) 0,05 g.

Se trabajó con la cascarilla de cacao de la variedad nacional. La muestra fue debidamente estandarizada (humedad residual, cenizas, fibra dietética, grasa, proteínas, carbohidratos, acidez, fenoles totales, actividad antioxidante, concentración de teobromina y de vitamina C).(21)

Todas las materias primas con un tamaño de partícula menor que 425 µm se mezclaron de forma manual en una funda de nylon. La masa de polvos obtenida se envasó en bolsas filtrantes de 5,5 x 6 cm (FOODYMINE) propias para las infusiones y que cumplen las especificaciones establecidas por la legislación Nacional y el Codex Alimentarius.

Control de calidad de la infusión

Se colocó la bolsa de infusión (1,05 g) en un vaso de precipitación, se agregaron 200 mL de agua a 100 °C, y se dejó reposar por 10 minutos.

Se evaluaron las características organolépticas, el pH (peachímetro digital marca BANTE), los grados Brix, el índice de refracción, el por ciento de fructosa, la glucosa, el azúcar invertida (refractómetro ANTON PAAR) y la densidad relativa por picnometría de la infusión. El control microbiológico se realizó según las normas del Manual de Análisis Bacteriológicos BAM/FDA (Bacteriological analytical manual- FDA/BAM por sus siglas en inglés-) y se determinó la presencia de gérmenes aerobios totales, mohos y levaduras, coliformes totales y enterobacterias.

La determinación de fenoles totales por Folin-Ciocalteu, así como la prueba de la capacidad secuestradora de radicales libres en la infusión se llevaron a cabo de la manera antes descrita.

Espectrometría de masas (EM) mediante infusión directa

Se diluyó la infusión en MeOH: 0,1 % NH3 (8:2, v/v) hasta obtener una relación 1:10. Las EM se obtuvieron mediante infusión directa empleando un espectrómetro de masas de trampa de iones lineal LTQ-XLTM (Thermo ScientificTM) a velocidad de infusión de 8 µL/min, voltaje de ionización de 3,5 Kv, flujo de gases principal/auxiliar (12/8 unidades arbitrarias) y a temperatura del capilar de 275 °C. Los espectros se obtuvieron en modo negativo. El rango de masas evaluado fue 100-1200 Da. Los iones pseudomoleculares que mostraron mayor intensidad fueron aislados y fragmentados para obtener los espectros EMn. La energía de colisión se seleccionó experimentalmente y su valor promedio osciló entre 15 y 45.

Evaluación sensorial de la infusión

La aceptación sensorial del producto se evaluó mediante pruebas afectivas de dos tipos: aceptación o rechazo y escala hedónica verbal de siete puntos desde "me gusta extremadamente" hasta "me disgusta extremadamente". Se trabajó con 60 jueces consumidores. La infusión edulcorada con sacarosa (6,2 g/200 ml) fue presentada a los panelistas en vasos de plástico de 30 mL.

Análisis estadístico

Los parámetros estadísticos que se analizaron como la media y la desviación estándar se determinaron a través del software estadístico IBM SPSS versión 24.0.

 

 

RESULTADOS

Análisis de la droga cruda (hojas de moringa)

Se les realizaron las pruebas físico-químicas a las hojas de M. oleifera. En la tabla 1 se muestra el análisis proximal de la droga vegetal cruda junto con los resultados mencionados por Ilyas (22) y Sodamade.(23)

En la tabla 2 se muestra el contenido de los minerales presentes en las hojas de M. oleifera. En por ciento se resumen los que se encuentran en cantidades apreciables (N, P, K, Ca, Mg, As, Pb) y en mg/kg los que se presentan en cantidades inferiores (Zn, Cu, Fe, Mn y Na).

Determinación de los fenoles totales según el método de Folin-Ciocalteu en la droga vegetal cruda

La curva de calibración obtenida para el ácido gálico después del análisis de regresión lineal, dio como resultado la siguiente ecuación: Absorbancia = -0,00215556 + 1,17362*Conc. con un R2 de 99,859. La cuantificación de polifenoles totales presentes en las hojas de moringa fue de 3 521 mg EAG/ 100 g de droga vegetal.

Determinación de la capacidad secuestradora de los radicales libres frente al 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH) en la droga vegetal cruda

La droga vegetal cruda mostró un por ciento inhibitorio del radical DPPH de 85,74 /0,34.

Control de calidad de la infusión

La tabla 3 muestra los parámetros de calidad evaluados en la infusión de hojas de M. oleifera.

 

La tabla 4 muestra los metabolitos identificados mediante espectrometría de masa, los cuales pertenecen, fundamentalmente, a la familia de los glucosinolatos y a los compuestos polifénolicos, en especial flavonoides glicosidados. La propuesta estructural asignada se realizó por comparación de los iones moleculares obtenidos y su correspondiente fragmentación, con lo referido por otros autores para dicha especie(23, 24, 25, 26, 27, 28, 29).

 

 

DISCUSIÓN

Análisis farmacognóstico de la droga vegetal cruda

La droga vegetal cruda presentó un color verde y un olor característico, que no muestra evidencia alguna de posible deterioro por putrefacción, algo que es posible que ocurra en esta planta.

Los análisis que evalúan la calidad de la droga vegetal cruda se muestran en la tabla 1 junto a los mencionados por otros autores. Con relación a la pérdida por desecación, se obtuvieron valores que cumplen con los parámetros establecidos que no deben exceder del 12 % para garantizar la adecuada conservación.(24)

La evaluación de las cenizas totales, si bien no es un requisito exigido para el té de hierbas aromáticas según las normas ecuatorianas, es un parámetro de gran utilidad para valorar la pureza y la identidad de la droga vegetal.(18) En este caso, las cenizas totales tuvieron un valor promedio de 8,64 %, inferior en algunos casos a lo mencionado por otros autores. Hay que tener presente que el suelo es un elemento esencial para definir la calidad de una materia prima vegetal, ya que provee los nutrientes necesarios, así como los compuestos que pudieran invalidar su uso. El porcentaje de cenizas insolubles en el ácido fue 0,12 %, valor que se encuentra dentro de los límites establecidos, en la norma (inferior al 2 %).(24)

Para las proteínas totales presentes en las hojas secas, se obtuvieron valores que se acercan a los reportes de la literatura científica. Una de las características más destacadas de las hojas de moringa es el elevado contenido de proteína en sus hojas. Existen estudios realizados por Fuglie(30) sobre el uso de esta planta en múltiples casos de desnutrición extrema. Olson y Fahey(10) con respecto al análisis del contenido proteínico de las hojas secas describen que hasta el 30 % de su peso está formado por proteína y que la mayor parte parece ser directamente asimilable.

Como parte del análisis proximal de la droga vegetal, se determinó el aporte de fibra cruda y de grasa, 6,41 % y 5,6 %, respectivamente, estos por cientos están dentro de los valores mencionados por otros investigadores (Tabla 1).

En la tabla 2 se muestra el análisis de los minerales. Los resultados guardan relación con los descritos por Placencio y Brito.(31) En el caso en cuestión, la concentración de cobre fue algo superior y ligeramente inferior a las de zinc, manganeso y magnesio. La mayor diferencia estuvo en la concentración de hierro. Con relación a los estudios de Márquez,(32) se destaca la presencia de hierro, manganeso, cobre, magnesio y zinc. Los valores obtenidos en el presente estudio son superiores a excepción del hierro.

Según la literatura existen distintos valores para los diferentes minerales cuantificados.(32,33) Las elevadas concentraciones de minerales con el hierro y el calcio confirma el uso como complemento nutricional que se atribuye a la especie.

Si bien los niveles de materia inorgánica en las hojas de moringa son elevados, estos no corresponden a la presencia de metales pesados (arsenio y plomo). Las muestras analizadas cumplen con los requisitos establecidos por la norma,(24) esto indica que la droga vegetal está apta, en este sentido, para el consumo humano.

Los resultados obtenidos para la cuantificación de fenoles totales (3521 mg EAG/100 g de droga vegetal) están dentro de los valores informado en la literatura (2090-12200 mg EAG/100 g).(9)

La droga vegetal cruda extraída en las mismas condiciones en las que se realizó Folin-Ciocalteu, fue evaluada en cuanto a su capacidad secuestradora de radicales libres (DPPH) y mostró un por ciento inhibitorio de 85,74 /0,34.

Muchos estudios han demostrado la actividad antioxidante de las hojas de M. oleifera, sobre todo, en diferentes tipos de extractos, y presentan su máxima actividad en extractos hidroalcohólicos. Los autores demostraron que diferentes extractos de las hojas tuvieron una capacidad secuestradora de radicales libres, dependiente de la dosis, siendo inferior en extractos acuosos de hojas.(9,34)

Elaboración de la formulación y control de calidad del extracto acuoso (infusión)

La combinación de hojas de moringa con la cascarilla de cacao se realizó buscando mejorar las características organolépticas de la infusión, fundamentalmente sabor, olor y color. La infusión con moringa, solamente, tiene un sabor entre amargo y picante, y un olor característico no atractivo. La cascarilla de cacao, además de mejorar las características sensoriales, aporta a la infusión desde el punto de vista nutricional y funcional. Según estudios realizados por Vivanco(21), contiene un 8,75 % de proteínas, 35,24 % de carbohidratos, 0,61 % de teobromina, 0,04 % de vitamina C, 1 020 mg de polifenoles EAG/100g de droga seca y logra una inhibición del radical libre DPPH del 87,28 %. Por todo lo antes expuesto, este es un aditivo que actúa de manera sinérgica con el ingrediente activo esencial, sobre todo, en su actividad antioxidante. La adición de ácido cítrico logró enmascarar de manera satisfactoria el sabor, lógicamente, luego de endulzar la infusión al gusto del consumidor.

Una vez preparada la infusión sin endulzar, se determinaron los parámetros que se aprecian en la tabla 3, los cuales definen la calidad de la misma y hacen posible su caracterización.

El control microbiológico mostró que en todos los microorganismos analizados existen menos de 10 colonias por gramo, por lo que la preparación se considera de buena calidad según la norma NTE INEN 2392:2013.(24)

El contenido de fenoles totales fue de 43,2 mg de polifenoles EAG por cada funda de té con un peso neto de 1,05 g. Es decir, siempre que beba una taza de infusión de 200 mL, estaría consumiendo 43,2 mg de compuestos polifenólicos.

Ilyas(22) evaluó el perfil nutricional y el potencial antioxidante de la hoja de moringa, del polvo de las semillas y sus correspondientes infusiones. Al cuantificar el contenido de polifenoles en infusiones que contenían 1g, 2g y 3g, se lograron valores de: 35,51; 74,10 y 99,51 mg EAG/100mL, respectivamente.

El análisis químico de la infusión por EM sugirió la presencia de compuestos ya referidos con anterioridad para las hojas de la especie, siendo los marcadores químicos flavonoides glicosidados y glucosinolatos (Tabla 4).

Esta especie contiene varios miembros poco comunes de la familia de los glucosinolatos con características peculiares, dadas por la presencia en su estructura de un segundo residuo de sacárido en la cadena lateral del aglicón.(35) Los glucosinolatos juegan un importante rol en la promoción de la salud y en la prevención de enfermedades.(36)

Estudios han demostrado que la ingesta de flavonoides posee efectos antioxidantes, protectores contra enfermedades infecciosas sean bacterianas o virales y degenerativas tales como afecciones cardiovasculares, cáncer, entre otras, asociadas con el envejecimiento.(37)

Con relación a la capacidad secuestradora de radicales libres, actualmente existe un creciente interés por conocer y aplicar las propiedades benéficas de alimentos naturales con actividad antioxidante. Los resultados muestran que la infusión es capaz de inhibir el radical libre DPPH en un 70,70 /0,31 %.

La evaluación sensorial mediante una prueba de aceptación o rechazo por parte de 60 jueces no entrenados dio como rsultado que 59 jueces consumidores aceptaron el producto, por tanto, se puede decir que existe diferencia significativa entre el número de jueces que aceptan y los que no aceptan el producto. Paralelamente, mediante una escala hedónica verbal se determinó que de los 60 juicios emitidos, el 78,3 % calificaron la bebida entre me gusta y me gusta extremadamente.

Los resultados obtenidos en este estudio no solo validan lo que internacionalmente ya se ha mencionado acerca de las hojas de moringa en otras regiones geográficas, sino que demuestran que en la infusión objeto de estudio existen los compuestos bioactivos que sustentarían la efectividad de esta planta como posible alimento funcional.

 

 

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Contribución de los autores

Mercedes Campo F. Responsable del proyecto y guía de todo el proceso de investigación. Encargada de estructurar la publicación. Coordinadora del proyecto que se investiga.

Carla Gabriela Sojos A.; Elsa Viviana Bastidas B.; Karla María Silva S. Estudiantes que desarrollaron su trabajo de tesis en el tema que se aborda.

Nubia L Matute C. se encargó del estudio de evaluación sensorial y la orientación según las normativas vigentes en el país en materia de alimentos funcionales.

Jorge Vicente Cun C. es el agrónomo responsable del cultivo y mantenimiento de las siembras de moringa.

Osmany Cuesta-R. es el especialista encargado del trabajo con el equipo de espectrometría de masas y el procesamiento de los resultados.

Carmita Galdys Jaramillo J. e Ingrid Márquez H. fueron las profesionales encargadas de procesar y analizar la cascarilla de cacao empleada en el estudio.

 

Conflicto de intereses

Los autores expresan que no tienen conflicto de intereses.

 





Copyright (c) 2019 Mercedes Campo Fernández, Carla Gabriela Sojos A, Elsa Viviana Bastidas B, Karla María Silva S., Nubia Lisbeth Matute C., Jorge Vicente Cun C., Osmany Cuesta R, Carmita Gladys Jaramillo J, Ingrid Márquez H.

Licencia de Creative Commons
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